瀏覽數(shù)量： 0 作者： 本站編輯 發(fā)布時(shí)間： 2024-05-15 來源： 本站
氣體是人體細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣（O2）和二氧化碳（CO2）。O2參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的能量和合成細(xì)胞生長(zhǎng)所需用的各種成分。體外培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于95%空氣加5% CO2混合氣體環(huán)境中，所以在密封的條件下，不能不用CO2。
一般細(xì)胞培養(yǎng)液的pH在7.0-7.4之間。由于碳酸鹽pH緩沖系統(tǒng)是一種生理pH緩沖系統(tǒng)（它是人體血液中最重要的pH緩沖系統(tǒng)），大多數(shù)培養(yǎng)液用它來保持穩(wěn)定的pH。用粉末配制培養(yǎng)液時(shí)，常常需要加入一定量的NaHCO3。對(duì)大多數(shù)以碳酸鹽作為pH緩沖系統(tǒng)的培養(yǎng)液而言，為了維持穩(wěn)定的pH，培養(yǎng)箱中的CO2需要維持在2-10%之間，以保持培養(yǎng)液中溶解的CO2的濃度。同時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)的器皿需要一定程度的透氣，以便于氣體的交換。
問：細(xì)胞培養(yǎng)為什么需要CO2？
CO2既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物，也是細(xì)胞所需成分。細(xì)胞培養(yǎng)所用的培養(yǎng)箱一般為CO2培養(yǎng)箱。
一是：CO2培養(yǎng)箱能夠?qū)囟?、CO2濃度和濕度提供精確穩(wěn)定的控制，以便于其研究工作的進(jìn)展；
二是：CO2培養(yǎng)箱能夠?qū)ε囵B(yǎng)箱內(nèi)的微生物污染進(jìn)行有效的防范，并且能夠定期消除污染，以保護(hù)研究成果，防止樣品損失。
問：采用其他pH緩沖系統(tǒng)后還需要CO2培養(yǎng)箱嗎？
細(xì)胞培養(yǎng)的氣體環(huán)境一般是95%的空氣和5%的CO2。但空氣中的CO2濃度很低，培養(yǎng)液中的HCO3會(huì)被耗盡，從而影響細(xì)胞的正常生長(zhǎng)，所以需要CO2培養(yǎng)箱去維持環(huán)境中的CO2濃度。
細(xì)胞培養(yǎng)液中常附加其他的pH緩沖系統(tǒng)，比如HEPES緩沖系統(tǒng),來增加pH緩沖能力。HEPES在pH 7.2-7.4之間有很強(qiáng)的緩沖能力，當(dāng)透氣的培養(yǎng)器皿被拿到CO2培養(yǎng)箱外面的時(shí)候，由于空氣中CO2濃度很低，培養(yǎng)液中碳酸鹽緩沖系統(tǒng)就會(huì)失去效果，這時(shí)候HEPES緩沖系統(tǒng)就能繼續(xù)保持pH的穩(wěn)定。
問：為什么動(dòng)物細(xì)胞用CO2培養(yǎng)箱，植物細(xì)胞不用？
通常來說，CO2培養(yǎng)箱主要用來模擬形成一個(gè)類似細(xì)胞在生物體內(nèi)的生長(zhǎng)環(huán)境，例如提供適當(dāng)?shù)膒H值、溫度、濕度等。CO2不僅是細(xì)胞生長(zhǎng)的必需成分，還與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)，刺激細(xì)胞呼吸。植物體細(xì)胞可以在離體的情況下增值分化，對(duì)CO2的要求不高，一般空氣中的濃度就可以滿足，只需保證空氣新鮮干凈即可。而動(dòng)物體細(xì)胞不行，所以動(dòng)物體細(xì)胞需要CO2培養(yǎng)箱，而植物體細(xì)胞可以不使用CO2培養(yǎng)箱。
問：大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)為什么用5% CO2？
細(xì)胞培養(yǎng)中所用的培養(yǎng)箱一般稱為CO2培養(yǎng)箱，它的氣體環(huán)境是95%的空氣和5%的CO2。
CO2既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物，也是細(xì)胞所需成分，它主要與維持培養(yǎng)液的pH有直接關(guān)系。動(dòng)物細(xì)胞多數(shù)需要微堿性環(huán)境，pH為7.2～7.4，以不超出6.8～7.6為宜。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，隨著CO2釋放量的增多，培養(yǎng)基會(huì)變酸，因此常加入NaHCO3（與CO2溶于水后所形成的H2CO3構(gòu)成一個(gè)緩沖對(duì)）來調(diào)節(jié)pH NaHCO3具有釋放CO2的傾向，加入CO2可以抑制這個(gè)反應(yīng)的進(jìn)行。
培養(yǎng)箱中CO2濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中NaHCO3濃度相平衡，如果培養(yǎng)箱中CO2濃度設(shè)定在5%，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量應(yīng)為1.97 g/L；如果CO2濃度維持在10%，則NaHCO3的加入量應(yīng)為3.95 g/L。
總之，細(xì)胞的培養(yǎng)中，O2、CO2都是細(xì)胞生存的必要條件。氧氣參與細(xì)胞的三羧酸循環(huán)，為細(xì)胞生存、代謝與合成提供能量；CO2既是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物，是細(xì)胞生長(zhǎng)的必需成分，又與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。大多數(shù)細(xì)胞適宜的pH范圍往往是7.2—7.4。
