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干貨分享 | 考馬斯亮藍染色法

瀏覽數(shù)量: 0     作者: 本站編輯     發(fā)布時間: 2024-08-05      來源: 本站

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干貨分享 | 考馬斯亮藍染色法

在蛋白質(zhì)研究中,清晰的蛋白質(zhì)可視化是關(guān)鍵??捡R斯亮藍染色法是一個經(jīng)典且高效的解決方案,可以快速顯示凝膠中的蛋白質(zhì)條帶,無論是新手還是經(jīng)驗豐富的研究者,都能從中獲益。讓我們一起了解這項實用的染色技術(shù)吧!

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概念

考馬斯亮藍染色法是一種廣泛使用的蛋白質(zhì)染色技術(shù)。它通過亮藍G-250與蛋白質(zhì)的結(jié)合,使蛋白質(zhì)在凝膠中呈現(xiàn)藍色,從而可以在凝膠中可視化蛋白質(zhì)。


分類

考馬斯亮藍染色主要有兩種類型:快速染色和傳統(tǒng)染色??焖偃旧梢栽?-2小時內(nèi)完成,但靈敏度較低,傳統(tǒng)染色需要更長的時間(通常一夜),但靈敏度更高。


實驗步驟

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01 蛋白質(zhì)電泳

首先通過SDS-PAGE電泳分離蛋白質(zhì),并根據(jù)蛋白質(zhì)的大小和電荷選擇合適的凝膠和電泳條件。

02 染色

電泳結(jié)束后,將凝膠放入含亮藍G-250染色液的容器中,放在搖床上搖動,確保染色液均勻接觸到凝膠的每一部分。快速染色通常需要搖動1小時,傳統(tǒng)染色則需要搖動一夜。

03 去染

將凝膠從染色液中取出,放入去染液中去除多余的染色液,使得背景清晰??焖偃ト就ǔP钃u動30分鐘至1小時,傳統(tǒng)去染則需搖動2-3小時,或直到蛋白質(zhì)條帶清晰可見。

04 觀察與記錄

將凝膠放在顯微鏡下觀察結(jié)果,必要時可用相機或掃描儀記錄結(jié)果。

常用試劑配方


01 染色液配方

a、亮藍G-250:0.1%(w/v)
b、甲醇:50%(v/v)
c、醋酸:10%(v/v)
d、去離子水:余量
e、操作步驟:將亮藍G-250溶解在甲醇中,加入醋酸,再加入去離子水,調(diào)整到最終體積。

02 去染液配方

a、甲醇:40%(v/v)
b、醋酸:10%(v/v)
c、去離子水:余量
d、操作步驟:混合甲醇和醋酸,再加入去離子水,調(diào)整到最終體積。

常見問題與解決方案


問: 染色效果不好

答:可能是染色時間不足或染色液配制不當(dāng)??梢匝娱L染色時間或檢查染色液配制,確保亮藍G-250濃度和pH值都在正確的范圍內(nèi)。

問:背景過深

答:可能是去染不充分??煽紤]延長去染時間或更換新鮮去染液。

問:蛋白質(zhì)條帶不明顯

答:可能是蛋白質(zhì)濃度過低或電泳條件不適。可增加樣本蛋白質(zhì)濃度或優(yōu)化電泳條件(調(diào)整電壓或電泳時間)。

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